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| 荧光素酶底物（Luciferin） |
| 发布时间:2022-06-21 12:16:11 | 浏览次数： |
| 简介: 荧光素（Luciferin）是常见生物性发光报告基因荧光素酶（Luciferase）在体内成像的底物。作用原理是荧光素酶在Mg2+和O2参与下催化荧光素氧化成oxyluciferin,在荧光素的氧化过程中，发出蓝绿色(560nm)生物荧光(bioluminomescence),当底物过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关,通过化学发光仪或液闪测定仪测定生物荧光,由于没有背景干扰，因此可以很容易地检测出低至0.02 pg 水平的荧光素酶。目前市场上有三种产品形式，D-荧光素（游离酸），D-荧光素钠盐，以及D-荧光素钾盐。这三种产品主要的差别在于溶解特性上。D-荧光素（游离酸）水溶性以及缓冲体系的溶解性都很弱，除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10 mg/ml）和DMSO（50 mg/ml）。但钠盐和钾盐形式的D-荧光素能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中，使用方便，溶剂无毒性，特别适合体内实验。配成液体后的这三种产品，在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。 外观:淡黄色或白色固体粉末 储存:-20℃低温避光保存 溶解:溶于水(60mg/mL) 结构式使用方法: 1：In Vitro Bioluminescent Assays/体外生物发光检测 1）配制成100 mM的储存液（200×，浓度30mg/ml）。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。 2）用预热好的组织培养基1∶200稀释储存液，配制工作液(终浓度150μg/mL)。 3）去除培养细胞的培养基直至无残留。 4）图像分析前立即向细胞内添加1×荧光素工作液，然后进行图像分析（或者细胞放在37℃短时间孵育后检测可增强信号）。 2：In vivo analysis in mice /小鼠活体成像分析 1）用无菌的DPBS（w/o Mg2+、Ca2+）配制D-荧光素钾盐溶液(15mg/mL)，0.2um滤膜过滤除菌。一旦使用，保持冰冷且避光。 2）按10 μL/g体重的浓度向每支小鼠注射相应量的15mg/mL荧光素溶液； 3）腹腔注射10-15 min后进行成像分析。（对每只动物模型做荧光素动力学研究以确定峰值信号获取时间） 注意事项： 1）本品保存和操作的过程中都要避光。另外储存液过滤除菌后，-80℃分装保存，避免反复冻融。如果有条件，对储存液充氮气或氩气（防止氧化），稳定性和保存时间更长，长达1年。 2）注射方式，动物类型以及体重等都会影响信号的发射，因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线，确定最佳信号平台期和最佳的检测时间。 |
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