1. 电转化基本步骤

    参考 Holo 的方法，并 作修 改。具 体 如 下，第 1 天 挑 取 划 线 培 养 的 NZ3900 单菌落接种于 5 mL GM17 培养液中，30 ℃ 静置培养 12 h，再从其中取出 500 μL 培养液转接 于 10 mL SGM17 中，30 ℃ 静置培养 12 h。第 2 天 将 10 mL 培养液转接于 100 mL SGM17 中，30 ℃ 静 置培养一定时间( 2、3、4、5、6 h) ，冰浴 20 min 后，离 心，弃上清。用 40 mL 预冷的溶液Ⅰ重悬菌体，冰 上静止 20 min 后，离心，弃上清。用 25 mL 预冷的 溶液Ⅱ重悬菌体，冰上静置 20 min 后，离心，弃上 清。再用 15 mL 预冷的溶液Ⅰ重悬菌体，冰上静置 20 min 后，离心，弃上清。最后加入 1 mL 预冷的溶 液Ⅰ重悬菌体，按 50 μL /支分装，－ 80 ℃ 存放。上 述操作的所有离心条件均为 4 ℃，5 000 r/min 离心 10 min。

  从 -80 ℃ 冰箱 中取出感受态细胞，置于冰上解冻 10 min; 取 1 μL 质粒加入感受态细胞中混合均匀后转移至已预冷 的电击杯中，轻轻敲击电击杯使混合物进入电击杯 的底部; 选择不同电压电击完毕后迅速加入 950 μL 预冷的 GM17MC 恢复培养基，30 ℃ 静置复苏培养 2 h，涂布溴甲酚紫筛选培养基平板，培养 24 ～ 48 h 后计算总菌落数和黄色菌落数目。

2.最优化电转化条件：

   在固定电阻200 Ω、电容25 μF 条 件下，收获对数生长前期的乳球菌制作感受态细胞，并以80 μL 体积分装，采用2 mm 规格的电击杯，加 入浓度为 1． 2 μg /μL 的质粒，在电场强度和脉冲时间分别为 10 kV/cm 和 5 ms 的条件下完成电击转 化。转化后的菌液恢复培养 2 h 后涂板计数，转化效率最高可以达到 2． 6 × 104 CFU/μg DNA。