大肠杆菌载体 E.coli Vector 大肠杆菌宿主菌株 E.coli 细菌广宿主载体 bacateria broad range host vector 链霉菌载体及菌株 Streptomyces 芽孢杆菌载体 Bacillus vector 芽孢杆菌宿主菌株 乳酸菌载体 lactic acid bacteria vector 乳酸菌宿主菌株 lactic acid bacteria strain 细菌基因敲除载体 毕赤酵母载体 毕赤酵母宿主菌株 酿酒酵母载体 酿酒酵母宿主菌株 丝状真菌载体 mold/fungi vector 乳酸克鲁维酵母载体 酵母真菌基因敲除基因编辑载体 植物细胞载体 plant cell vector 农杆菌菌株Agrobacterium tumefaciens strain 植物细胞基因敲除载体 plant cell 哺乳动物细胞载体 哺乳动物细胞荧光载体 荧光素酶报告基因载体 哺乳动物细胞基因敲除基因编辑载体 杂交系统 慢病毒载体 腺病毒载体 逆转录病毒载体 杆状病毒表达载体 基因干扰 RNAi载体 基因/cDNA/ORF 转座子质粒系统 transposon 金黄色葡萄球菌载体 staphylococcus aureus 假单胞菌载体 噬菌体 phage 不动杆菌载体 双岐杆菌载体 藻类表达载体 链球菌载体 厌氧菌载体 基因治疗载体 大肠杆菌基因突变体菌株 细菌荧光质粒 白色念珠菌载体 体外转录载体 谷氨酸棒杆菌载体 酿酒酵母基因突变体菌株 线虫载体 斑马鱼载体 Zebra fish 果蝇，昆虫载体Drosophila 鱼类细胞载体 fish cell 分支杆菌载体 克雷伯菌 枯草芽孢杆菌基因缺失突变株
| 大肠杆菌整合型表达载体整合位点的选择，优选出11个位点并进行评估 |
| 发布时间:2022-10-03 13:39:28 | 浏览次数： |
| 近年来随着生物技术的发展与进步，大肠杆菌作为生物精炼平台，被广泛的应用于生产一些具有商业价值的代谢产物。质粒表达系统无法在工业生产后期保持性状稳定一直是困扰多年的难题，而将外源基因整合至细菌基因组可从根本上解决质粒表达系统带来的不稳定性等因素。为获得性状稳定的工程菌，多年来人们为其开发了大量工具及基因编辑技术，但将外源基因的合成途径整合到基因组的哪个位置目前仍悬而未决。 为解决这一问题，来自比利时根特大学的Sofie L. De Maeseneire团队从大肠杆菌基因组选择了26个符合标准的位点，对基因表达与基因所在的位置、基因方向与复制叉的关联性、菌体生长选取的碳源及氮源、DNA的折叠与超螺旋及其生长负担等多个条件进行研究。为实现上述研究，作者设计了一个不受上下游其他片段影响的荧光表达盒，从而避免特定位点对基因表达的干扰确保实验的准确性。 实验结果表明，改变该表达盒在基因组的不同位置所造成的表达量差异仅为2.4倍，这远远小于启动子与核糖体结合位点对于表达量造成的影响，但不同插入位点对培养基的选择、环境胁迫及代谢负担方面的影响则是非常巨大的。 最终，作者依照实验结果构建了一份基因组表达位点列表，并对各个位点进行了评价，从中选择出yjip_yjiR、thrW_ykfN、ykgH_betA、ileY_ygaQ、ypjC_ileY、dadX_cvrA、ykgA_ykgQ 、yeeJ_yeeL、ybfC_ybfQ,、cspF_quuQ、ymgF_ycgH这11个位点，并证明插入负担对上述点位无显著的影响，这使得上述点位成为稳定表达外源基因的不二之选。作者认为该工作将有助于构建优良底盘菌文库，并促进及发展适合工业生产环境的稳定宿主菌。 参考文献： Comprehensive study on Escherichia coli genomic expression: Does position really matter?Metabolic Engineering，Volume 62, November 2020, Pages 10-19参考文献链接：
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S1096717620301166?via%3Dihub#!
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