产品介绍

脆弱拟杆菌NCTC9343胞外多糖提取纯化

1. 菌株培养

脆弱拟杆菌NCTC9343是一种专性厌氧菌，可以在严格厌氧的条件下用BHI脑心浸出液培养基来培养，在培养基中加入氯化血红素、维生素K₁和胆盐可促进其生长。脆弱拟杆菌在商品化哥伦比亚血琼脂平板也能够正常生长。最佳培养温度 37度，单菌落周期 72小时左右，液体培养需静置，勿摇动。

2. 多糖提取

    （1）液体培养的脆弱拟杆菌NCTC9343菌液（OD值在4-5） 体积 500ml；

（2）菌液用低温离心机 4度，12000rpm离心10min，弃菌体沉淀，收集上清液；

（3）上清液中加入3倍体积的冰乙醇，缓慢搅拌均匀后，观察絮状多糖沉淀出现，将混合物其置于-20度冰箱过夜；

（4）多糖沉淀混合物，用低温离心机 4度，12000rpm离心20min，弃掉上清液，

     收集离心管底部多糖沉淀；

（5）多糖沉淀用10倍体积无菌水重新溶解，然后加入1/3体积的Sevag试剂，混匀后，可以在有机相和水相交接处，看到蛋白沉淀，离心后小心收集上层水相清液。

（6）上层水相清液转移到新的玻璃容器后，加入3倍体积的冰乙醇，缓慢搅拌均匀后，观察絮状多糖沉淀出现，将混合物其置于-20度冰箱过夜；

（7）多糖沉淀混合物，用低温离心机 4度，12000rpm离心20min，弃掉上清液，

     收集离心管底部多糖沉淀；适当体积无菌水重新溶解，置于-20度冰箱可以长期保存。

3. 实验需要设备和试剂：国产厌氧手套箱

                厌氧培养瓶

                三菱厌氧产气袋

               商品化哥伦比亚血琼脂平板

                Sevag试剂：氯仿：正丁醇（5:1/体积比）

基本信息