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转座子质粒系统 transposon
携带有pRL27转座质粒的大肠杆菌 E. coli 3021
发布时间:2022-10-02 12:04:30 | 浏览次数:

E. coli 3021

转座子pRL27载体(含Tn5)属于窄宿主范围质粒之一,必须有pir基因产物,转座子pRL27载体(含Tn5)才会复制。所以,其必须要在大肠杆菌菌株(含如pir基因)抑或与其有紧密联系的相关细菌内才能够完成复制。下面即为pRL27的基本特征:

其一,含IRs(反向重复序列),外源染色体片段能够有效插入2个IRs间区域;

其二,转座部分,Tn5化的转座酶基因在Tn中并不充足,Tn5转座酶基因编码由转座区域之外序列完成,这表明,如果有转座产生,那么后续转座将不会二次发生,极为稳定的突变将因此形成;

其三,tnpA基因的突变不止一个,这将会让转座酶活性表现极为活跃,也表明野生型转座酶远低于其转座效率;

其四,由于转座子有npt活性,所以,卡那霉素抗生素KmR(耐药性)在插入位置表现明显;

其五,复制起点包括oriT,oriR6K,因此,经由oriT复制起点,质粒能把载体自我复制过程中的拷贝数增多,同时,目的基因内如果插入转座子,自连总DNA酶切(突变株)后,oriR6K就能运用于复制的起始位点,自我复制也能随之展开,自连质粒中有Tn5的DNA片段,质粒具有抗生素的抗性,能够重新转化大肠杆菌的感受态细胞,采用抗性筛选技术,能够直接获得己经突变的目的基因,并能在序列双侧的插入序列基础上设计出引物,由此检测基因序列;

其六,完善插入位点、转座酶,删除无关紧要的序列,以此最小化载体,这对基因操作来说十分便利。




 
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