热带假丝酵母Candida tropicalis 基因敲除

质粒/菌株

质粒改造
质粒抗性改造组成型/诱导型荧光质粒质粒复制起点更换质粒启动子替换合成生物学质粒构建
现货质粒菌株
大肠杆菌载体 E.coli Vector 大肠杆菌宿主菌株 E.coli 细菌广宿主载体 bacateria broad range host vector 链霉菌载体及菌株 Streptomyces 芽孢杆菌载体 Bacillus vector 芽孢杆菌宿主菌株乳酸菌载体 lactic acid bacteria vector 乳酸菌宿主菌株 lactic acid bacteria strain 细菌基因敲除载体毕赤酵母载体毕赤酵母宿主菌株酿酒酵母载体酿酒酵母宿主菌株丝状真菌载体 mold/fungi vector 乳酸克鲁维酵母载体酵母真菌基因敲除基因编辑载体植物细胞载体 plant cell vector 农杆菌菌株Agrobacterium tumefaciens strain 植物细胞基因敲除载体 plant cell 哺乳动物细胞载体哺乳动物细胞荧光载体荧光素酶报告基因载体哺乳动物细胞基因敲除基因编辑载体杂交系统慢病毒载体腺病毒载体逆转录病毒载体杆状病毒表达载体基因干扰 RNAi载体基因/cDNA/ORF 转座子质粒系统 transposon 金黄色葡萄球菌载体 staphylococcus aureus 假单胞菌载体噬菌体 phage 不动杆菌载体双岐杆菌载体藻类表达载体链球菌载体厌氧菌载体基因治疗载体大肠杆菌基因突变体菌株细菌荧光质粒白色念珠菌载体体外转录载体谷氨酸棒杆菌载体酿酒酵母基因突变体菌株线虫载体斑马鱼载体 Zebra fish 果蝇，昆虫载体Drosophila 鱼类细胞载体 fish cell 分支杆菌载体克雷伯菌枯草芽孢杆菌基因缺失突变株
工程菌菌株
质粒菌株资料

产品编号	产品名称
	热带假丝酵母Candida tropicalis 基因敲除

产品介绍

热带假丝酵母(Candida tropicalis)在发酵工业中具有重要的应用潜力，但二倍体遗传结构和较低的遗传转化效率限制了其代谢工程育种技术的应用。建立可靠的遗传转化技术并高效的删除目的基因是代谢工程改造热带假丝酵母的重要前提。文章以 C. tropicalis ATCC 20336 为出发菌株，通过化学诱变筛选获得了尿嘧啶缺陷型突变株 C. tropicalis XZX(ura3/ura3)。以丙酮酸脱羧酶(Pyruvate decarboxylase，PDC)基因作为靶基因构建了两端包含同源臂并在选择性标记 C. tropicalis URA3(Orotidine-5′-phosphate decarboxylase，乳清酸核苷-5-磷酸脱羧酶)基因两侧同向插入源于沙门氏菌(Salmonella typhimurium)的 hisG 序列的基因敲除盒 PDC1-hisG-URA3-hisGPDC1(PHUHP)，并转化宿主菌株 C. tropicalis XZX，筛选获得 PHUHP 片段正确整合到染色体的 PDC 基因位点的转化子 XZX02。在此基础上，将转化子 XZX02 涂布于 5-FOA(5-氟乳清酸)选择培养基上，筛选得到 URA3 基因从 PHUHP 片段中丢失的营养缺陷型菌株 XZX03。进一步构建了第 2 个 PDC 等位基因的删除表达盒 PDCmURA3-PDCm，并转化 C. tropicalis XZX03 菌株，获得转化子 C. tropicalis XZX04。经 PCR 和 DNA 测序确认转化子 C. tropicalis XZX04 细胞染色体上的两个 PDC 等位基因被成功敲除。文章建立了一种营养缺陷型标记可重复使用的热带假丝酵母遗传转化技术，利用该技术成功敲除了细胞的 PDC 基因，为进一步利用代谢工程改造热带假丝酵母奠定了基础。