质粒/菌株

全国免费电话

4000-571-271

工程菌菌株

33肽标签能够显著提高单链抗体在大肠杆菌可溶性表达

产品编号 产品名称
33肽标签能够显著提高单链抗体在大肠杆菌可溶性表达

产品介绍

单链抗体(single chain variable fragment,scFv)由抗体的重链和轻链可变区通过一段柔性多肽连接而成。scFv分子量仅约30 kDa,具有较高的组织穿透能力,在体内比抗体更快被清除。scFv可避免由Fc区介导的免疫反应。这些特征使scFv更适合应用在体内影像诊断、肿瘤和细胞内病原体的靶向治疗等领域。由于固有的低溶解度和稳定性,只有两种大肠杆菌生产的scFv已被批准用于治疗。因此,亟需相关手段提高大肠杆菌表达的scFv溶解度和稳定性,为scFv的生产、研究和应用奠定理论基础。


scFv的重链和轻链可变区的链内二硫键对于其稳定性至关重要。普通大肠杆菌细胞浆缺少催化二硫键形成的组分,且具有谷胱甘肽还原酶和硫氧还蛋白还原酶还原二硫键,因而多数在普通大肠杆菌细胞浆表达的scFv均呈不溶性的包涵体。一些具有促溶活性的蛋白标签如MBP、GST、NusA和Trx等,能够进一步提高它们的溶解度。然而,如MBP之类的促溶标签蛋白因体积庞大而形成空间位阻干扰scFv与抗原结合,故必需通过蛋白酶切去除;而去除促溶标签蛋白会使scFv不稳定,诱导产生无活性的聚集体。
来自T7噬菌体尾部的P17蛋白,通过一段由33个氨基酸组成的多肽(称P17多肽或标签)与肝细胞表面的低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)特异性结合将噬菌体颗粒和小分子、蛋白、核酸以及脂质体等靶向运送到肝细胞。研究选择能够靶向乙肝病毒包膜蛋白的G12-scFv作为研究对象,为了提高G12-scFv被肝细胞内吞的效率,将P17标签融合在其羧基末端。在大肠杆菌SHuffle菌株表达时,G12-scFv-P17蛋白的溶解度显著高于G12-scFv蛋白。半定量溶解度测定实验发现,P17标签能有效地提高其他3种不同scFv在SHuffle菌株中的溶解度,且P17标签对scFv的促溶效应与它在氨基和羧基末端的位置无关。缺失突变和点突变分析发现,P17标签对scFv的促溶效应与它的亲水序列尤其是带电氨基酸残基相关,而与可能存在的α螺旋二级结构无关。 
热稳定性实验表明,P17标签和链内二硫键一样提高scFv的热稳定性。P17标签融合的G12-scFv与抗原的结合能力以及它的病毒中和活性提高了超过两倍,这提示P17标签具有I型分子内伴侣样的活性。该研究发现33肽标签能够显著提高单链抗体在大肠杆菌Shuffle细胞中的溶解度和稳定性,为单链抗体的生产、研究和应用奠定理论基础。


参考文献:

A 33-residue peptide tag increases solubility and stability of Escherichia coli produced single-chain antibody fragments.  Nature Communications

文献链接:

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35941164/


基本信息

联系我们
技术产品咨询1 技术产品咨询2 客服热线 :17794589156 13989836147
地 址 : 杭州市萧山区新街街道新街科创园
QQ群号 : 202286967

技术交流QQ群二维码

产品服务咨询微信二维码

技术资料/产品说明

关于宝赛 | 如何订购 | 售后服务 | 联系我们
地址:杭州市萧山区新街街道新街科创园   电话号码:17794589156/ 1398983614
Copyright 2010-2023 杭州宝赛生物科技有限公司 版权所有
编号:54643153464444  备案号:浙ICP备11028186号-1