大肠杆菌载体 E.coli Vector 大肠杆菌宿主菌株 E.coli 细菌广宿主载体 bacateria broad range host vector 链霉菌载体及菌株 Streptomyces 芽孢杆菌载体 Bacillus vector 芽孢杆菌宿主菌株 乳酸菌载体 lactic acid bacteria vector 乳酸菌宿主菌株 lactic acid bacteria strain 细菌基因敲除载体 毕赤酵母载体 毕赤酵母宿主菌株 酿酒酵母载体 酿酒酵母宿主菌株 丝状真菌载体 mold/fungi vector 乳酸克鲁维酵母载体 酵母真菌基因敲除基因编辑载体 植物细胞载体 plant cell vector 农杆菌菌株Agrobacterium tumefaciens strain 植物细胞基因敲除载体 plant cell 哺乳动物细胞载体 哺乳动物细胞荧光载体 荧光素酶报告基因载体 哺乳动物细胞基因敲除基因编辑载体 杂交系统 慢病毒载体 腺病毒载体 逆转录病毒载体 杆状病毒表达载体 基因干扰 RNAi载体 基因/cDNA/ORF 转座子质粒系统 transposon 金黄色葡萄球菌载体 staphylococcus aureus 假单胞菌载体 噬菌体 phage 不动杆菌载体 双岐杆菌载体 藻类表达载体 链球菌载体 厌氧菌载体 基因治疗载体 大肠杆菌基因突变体菌株 细菌荧光质粒 白色念珠菌载体 体外转录载体 谷氨酸棒杆菌载体 酿酒酵母基因突变体菌株 线虫载体 斑马鱼载体 Zebra fish 果蝇，昆虫载体Drosophila 鱼类细胞载体 fish cell 分支杆菌载体 克雷伯菌 枯草芽孢杆菌基因缺失突变株
| 产品编号 | 产品名称 |
| 枯草 168菌株 重构突变体 超分泌能力 |
为了获得枯草芽孢杆菌高分泌蛋白效率的突变株。首先，研究对枯草芽胞杆菌Bs168进行了重构，过表达comK基因以使其能够诱导超级感受态细胞，提升其转化效率；对trpC2和gudB进行回复突变，使其能够在基本培养基（不需要添加色氨酸）中生长，并且能够有效利用谷氨酸族氨基酸；使用CRISPR/Cpf1敲除8种非必须的细胞外蛋白酶AprE、NprE、Epr、Mpr、Bpr、NprB、Vpr和WprA以减少对外源分泌蛋白的降解，对不同菌株的胞外蛋白产量和胞外蛋白酶活性进行表征后，选择敲除aprE、nprE、bpr、mpr和nprB的菌株G600进行进一步研究。
为了防止在构建穿梭质粒过程中由于细胞毒性导致的点突变，研究筛选了人工构建的启动子文库和114个枯草芽胞杆菌内源性组成型启动子以获得在大肠杆菌中不表达，但在枯草中高表达的启动子，最终确定了内源性组成型启动子Phag和PspovG作为蛋白表达启动子。进一步的，研究设计了一种带有信号肽的核糖体结合位点(RBS)系统组合优化方法(systemic combinatorial optimization of ribosome binding site equipped with signal peptide, SCORES)来优化外源蛋白的分泌和翻译。最后，研究使用重构的Bs168和优化的启动子、信号肽表达了通过降解核酸导致细胞死亡的粘质沙雷氏菌非特异性内切酶(Serratia marcescens nonspecific endonuclease,SMNE)，其摇瓶酶活达7.5 × 106 U/L，是对照RBS和信号肽组合(RS0)的7.5倍。
参考文献：
“A genetic toolkit for efficient production of secretory protein in Bacillus subtilis”
文献链接：
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36064082/
编号：54643153464444 备案号：浙ICP备11028186号-1