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BL21(DE3)基因编辑,优化改造T7RNA聚合酶启动子lacUv5, 减少本底表达,提高重组蛋白的表达水平

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BL21(DE3)基因编辑,优化改造T7RNA聚合酶启动子lacUv5, 减少本底表达,提高重组蛋白的表达水平

产品介绍

大肠杆菌BL21(DE3)是最常用的大肠杆菌重组蛋白表达的宿主菌,跟pET系列载体配合,能够发挥T7lac启动子的强启动活性,获得很高的蛋白产量。但是pET载体和BL21(DE3)的配合,有很大的问题,就是未加诱导剂的渗漏表达比较严重,这个特点在表达毒性蛋白等情况时候,比较难办,虽然有BL21(DE3)plysS和BL21(DE)plysS等衍生菌株,但是也很难克服这个问题。

经过数据分析,认为可以通过基因编辑的手段,将T7RNA聚合酶的lacUV5启动子替换为一个严谨型开关的诱导型启动子,比如鼠李糖启动子,阿拉伯糖启动子和四环素启动子。

经过实验结果证实,lacUv5启动子替换为四环素启动子效果最好,诱导前,本底表达水平很低,加入脱水四环素诱导后,表达量明显超过出发菌株BL21(DE3)。

参考文献:

Regulating the T7 RNA polymerase expression in E. coli BL21 (DE3) to provide more host options for recombinant protein production 

文献链接:

https://microbialcellfactories.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12934-021-01680-6/figures/1



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