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基因改造酿酒酵母底盘菌B184M分泌表达胶原酶

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基因改造酿酒酵母底盘菌B184M分泌表达胶原酶

产品介绍

将从组织溶梭状芽胞菌种获得的I型II型胶原酶基因colGcolH密码子优化后通过质粒转入蛋白分泌优化酿酒酵母底盘菌B184M中。使用添加终浓度10 mM氯化钙和0.6 mM氯化锌的YPD培养基发酵后对底物FALGPA(N-[3-(2-furyl) acryloyl]-Leu-Gly-Pro-Ala)表现出了较高酶活。为进一步提升酶活,作者对信号肽及启动子进行了优化,最终选择了TPI1p启动子并采用α因子信号肽-colG前导肽-colG这一结构进行表达获得了最高产量。随后作者通过对比重组菌株BG02(表达colG)和BH01(表达colH)的生长曲线发现两个蛋白主要分泌阶段处于生长过程中的不同时期,colG在较早时期就达到很高水平,而colH则分泌滞后,并推断增加NADPH水平可增产蛋白。


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