鱼腥藻7120的T7 RNA聚合酶表达系统，pRL489

质粒/菌株

质粒改造
质粒抗性改造组成型/诱导型荧光质粒质粒复制起点更换质粒启动子替换合成生物学质粒构建
现货质粒菌株
大肠杆菌载体 E.coli Vector 大肠杆菌宿主菌株 E.coli 细菌广宿主载体 bacateria broad range host vector 链霉菌载体及菌株 Streptomyces 芽孢杆菌载体 Bacillus vector 芽孢杆菌宿主菌株乳酸菌载体 lactic acid bacteria vector 乳酸菌宿主菌株 lactic acid bacteria strain 细菌基因敲除载体毕赤酵母载体毕赤酵母宿主菌株酿酒酵母载体酿酒酵母宿主菌株丝状真菌载体 mold/fungi vector 乳酸克鲁维酵母载体酵母真菌基因敲除基因编辑载体植物细胞载体 plant cell vector 农杆菌菌株Agrobacterium tumefaciens strain 植物细胞基因敲除载体 plant cell 哺乳动物细胞载体哺乳动物细胞荧光载体荧光素酶报告基因载体哺乳动物细胞基因敲除基因编辑载体杂交系统慢病毒载体腺病毒载体逆转录病毒载体杆状病毒表达载体基因干扰 RNAi载体基因/cDNA/ORF 转座子质粒系统 transposon 金黄色葡萄球菌载体 staphylococcus aureus 假单胞菌载体噬菌体 phage 不动杆菌载体双岐杆菌载体藻类表达载体链球菌载体厌氧菌载体基因治疗载体大肠杆菌基因突变体菌株细菌荧光质粒白色念珠菌载体体外转录载体谷氨酸棒杆菌载体酿酒酵母基因突变体菌株线虫载体斑马鱼载体 Zebra fish 果蝇，昆虫载体Drosophila 鱼类细胞载体 fish cell 分支杆菌载体克雷伯菌枯草芽孢杆菌基因缺失突变株
工程菌菌株
质粒菌株资料

产品编号	产品名称
	鱼腥藻7120的T7 RNA聚合酶表达系统，pRL489

产品介绍

外源基因的表达效率低是蓝藻基因工程发展的瓶颈之一，T7 RNA聚合酶表达系统实现了大肠杆菌中外源基因的高效表达，蓝藻与大肠杆菌同为革兰氏阴性菌，具有较高的遗传同源性，在蓝藻中构建T7 RNA聚合酶表达系统有可能提高外源基因在蓝藻中的表达效率。为了在鱼腥藻7120中构建T7 RNA聚合酶表达系统，采用重叠延伸PCR技术和酶切连接等方法构建能够表达T7 RNA聚合酶的定点整合载体pEASY-T1-F1-TacT7RNAPCmR-F2以及由T7启动子驱动hG-CSF基因表达的穿梭表达载体pRL-T7-hG-CSF；采用电击转化法将定点整合载体导入野生型鱼腥藻中，通过三亲接合的方法将穿梭表达载体转入已定点整合T7 RNA聚合酶的转基因鱼腥藻中。利用PCR技术鉴定外源基因在蓝藻中的存在；RT-PCR方法检测外源基因在蓝藻中的转录情况；Western blotting实验检测外源基因在蓝藻中的蛋白表达情况。结果表明两种载体构建成功，T7 RNA聚合酶基因和hG-CSF基因被转入鱼腥藻中，两个基因均在藻中表达，T7 RNA聚合酶表达系统在鱼腥藻中构建成功，与传统蓝藻表达系统相比，文中在鱼腥藻中构建的T7表达系统使hG-CSF基因的表达量提高2倍。该表达系统将为蓝藻基因工程的应用提供更优的工具，将促进蓝藻作为底盘细胞在合成生物学等领域的发展。