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| 产品编号 | 产品名称 |
| pK18mobSacB载体, 广泛用于细菌基因敲除的一种载体 |
pK18mobsacB载体使用范例
pK18mobsacB系列自杀性载体用于苜蓿中华根瘤菌SmdesA基因缺失突变株的构建，步骤如下：
（1） 以苜蓿中华根瘤菌Rm1021基因组DNA为模板，通过PCR分别扩增出SmdesA基因的上下游片段(Up，Down)，重叠PCR将SmdesA基因上下游片段连接起来扩增得到SmdesA (UpDn)，连接到pMD19-T，送测序。
（2） SmdesA (UpDn)用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ消化DNA片段后，连接到用相应限制性内切酶消化的pK18mobsacB载体上，得到pK18mobsacB-SmdesAUpDn。
（3） 用限制性内切酶HindⅢ 酶切p34S-Gm（抗体片段提供载体）回收Gm片段，将其接到pK18mobsacB-SmdesAUpDn载体上，得到pK18mobsacB-SmdesAUpDnGm，命名为pMJC4。
（4） 将pMJC4转化大肠杆菌S17-1菌株，与苜蓿中华根瘤菌野生型菌株RM1021在TY平板上30℃共培养48 h，然后将接合产物用1 ml TY液体培养基悬浮并稀释至1/105后布于添加有Km、Gm和Cm抗性的TY平板上，30℃培养72-96 h后得到单菌落。
（5） 选取单菌落培养抽提细菌总DNA．通过S1/S2引物和P1/P4引物进行PCR检测，获得一次重组菌株(整个质粒整合到苜蓿中华根瘤菌基因组中)。
（6） 将一次重组菌株在添加Cm的TY液体培养基中30℃培养72 h，将培养物稀释布于添加Cm的TY固体培养基上，将生长出来的单菌落分别转移到含有10%蔗糖、Cm和Km、Gm两种不同的TY固体培养基上，进行二次重组菌落的筛选．挑取对蔗糖不敏感而对Km和Gm敏感的单菌落培养并抽提总DNA，对备选菌株进行PCR验证．
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