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细菌基因敲除载体

金黄色葡萄球菌基因敲除质粒pYT3

产品编号 产品名称
金黄色葡萄球菌基因敲除质粒pYT3

产品介绍

 

 基本信息:pYT3质粒-用于金黄色葡萄球菌基因敲除的质粒主要使用温敏性质粒,如pBT2、pYT3等。pYT3质粒是一个大肠杆菌-金黄色葡萄球菌穿梭质粒,用于金黄色葡萄球菌基因敲除的研究。pYT3质粒的构建骨架是大肠杆菌高拷贝质粒pUC119.

pUC19为构建的基本骨架,通过overlap PCR的技术手段,把pCL52.1pLE194Ts温敏复制子及质粒pHY300PLK中四环素抗性基因片段,通过高保证扩增后,连接入pUC19EcoRⅠ位点,保留pUC19中所有的多克隆位点,构建大肠杆菌-金黄色葡萄球菌穿梭质粒,并对金黄色葡萄球菌N315 dapB基因进行敲除,通过多重PCR对基因敲除菌株进行鉴定。

结果与结论:成功构建了大肠杆菌-金黄色葡萄球菌穿梭质粒pYZ1pYZ8,并用于金葡菌基因的敲除,通过酶切及overlap技术构建了同源重组质粒pYZ-ΔdapB,电转入RN4220进行修饰后,再电转入N315,通过温度筛选,获得了dapB基因突变菌株,成功的敲除了dapB基因。提示pYZ1pYZ8能够成功用于金黄色葡萄球菌耐药菌株基因的敲除,为进一步研究临床金黄色葡萄球菌分离株耐药性及毒力提供了工具。

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