双歧杆菌感受态细胞的制备和电转化

方法一：将适量保存菌液加入5mLMRS液体培养基中，37℃培养48～72 h；取菌液50μL加入5 mL MRSS（MRS 含0.5M蔗糖）培养基中，37℃培养24h；上述培养菌液以1：25稀释于MRSS培养基中，37℃摇菌培养至对数生长期；菌液冰浴10min，4℃、8000 r／min离心5 min，弃上清，沉淀用冰预冷的0.5M无菌蔗糖溶液清洗2次，用1／250原始体积的冰预冷的蔗糖-柠檬酸胺缓冲液重悬细胞，分装，置-80℃保存。

方法二：将适量菌液加入250mLMRSS（MRS含0.5M蔗糖）培养基中，37℃厌氧培养至对数生长期：4℃、8000r／min离心5min，弃上清，沉淀用500mL无菌蔗糖（0.5M，含10％甘油）溶液清洗4次，用上述无菌蔗糖溶液400 μL重悬细胞，分装，置-80℃保存。

把1.0μg的重组质粒加入预冷的含有80μL双歧杆菌感受态细胞的悬液中；冰浴5min，转移到电击杯中电击；电击条件：电容25μF，电阻200Ω；电击完后，迅速涂在含氨苄青霉素的MRS琼脂培养基平板上，37℃厌氧培养。如需电击后复苏，则电击完后将液体转移至新鲜的1mL．MRSS培养液中，厌氧罐中静止培养，然后涂在含氨苄青霉素的MRS琼脂培养基平板上，37℃厌氧培养。