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| 产品编号 | 产品名称 |
| 如何提高贪铜菌H16的转化效率 |
摘要：
该研究的实验包括对电转菌株不同维度的多种测试。首先是作者通过使用不同大小的质粒进行电转，发现增加电转质粒的大小会显著降低电转效率，这与菌体内限制-修饰(Restriction-Modification, RM)系统息息相关。随后，为了降低这一现象，作者将电转质粒的主链进行了甲基化处理，随后发现电转效率提升了47倍。作者继续通过生物信息技术检测出假定的Wadjet系统。该系统已在science上被证明是抵御噬菌体的一种防御机制。在细菌中，Wadjet系统的主要功能是阻止质粒转化，可以防止过度的自发转化和单链噬菌体的入侵。在体外重建时，Wadjet系统能够选择性地切割质粒DNA。作者根据生信分析结果构建了不同的质粒，从而测试出该菌存在两个活跃的RM系统，表明I型和IV型限制酶参与了电转效率的降低。随后作者使用自杀质粒pLO3进行基因缺失，通过目标突变去除质粒中的限制序列，并在无甲基化的E. coli中转化以去除DNA甲基化，最终成功在钩虫贪铜菌中进行电转化。作者构建的缺失菌株钩虫贪铜菌ΔRM和ΔRMΔwad在转化效率上表现出显著改善，尤其是在去除I型限制酶后。但是作者后续又通过构建不稳定质粒以评估Wadjet系统对质粒稳定性的影响。结果显示，在不同基因型中，质粒的丢失率相似，表明Wadjet系统在所选条件下不影响电转效率或质粒稳定性。
参考文献：
ACS Synthetic Biology: Using Cupriavidus necator H16 to Provide a Roadmap for Increasing Electroporation Efficiency in Nonmodel Bacteria
编号：54643153464444 备案号：浙ICP备11028186号-1