敲除基因，减少枯草芽孢杆菌的细胞自溶以提高重组蛋白的的产量

质粒/菌株

质粒改造
质粒抗性改造组成型/诱导型荧光质粒质粒复制起点更换质粒启动子替换合成生物学质粒构建
现货质粒菌株
大肠杆菌载体 E.coli Vector 大肠杆菌宿主菌株 E.coli 细菌广宿主载体 bacateria broad range host vector 链霉菌载体及菌株 Streptomyces 芽孢杆菌载体 Bacillus vector 芽孢杆菌宿主菌株乳酸菌载体 lactic acid bacteria vector 乳酸菌宿主菌株 lactic acid bacteria strain 细菌基因敲除载体毕赤酵母载体毕赤酵母宿主菌株酿酒酵母载体酿酒酵母宿主菌株丝状真菌载体 mold/fungi vector 乳酸克鲁维酵母载体酵母真菌基因敲除基因编辑载体植物细胞载体 plant cell vector 农杆菌菌株Agrobacterium tumefaciens strain 植物细胞基因敲除载体 plant cell 哺乳动物细胞载体哺乳动物细胞荧光载体荧光素酶报告基因载体哺乳动物细胞基因敲除基因编辑载体杂交系统慢病毒载体腺病毒载体逆转录病毒载体杆状病毒表达载体基因干扰 RNAi载体基因/cDNA/ORF 转座子质粒系统 transposon 金黄色葡萄球菌载体 staphylococcus aureus 假单胞菌载体噬菌体 phage 不动杆菌载体双岐杆菌载体藻类表达载体链球菌载体厌氧菌载体基因治疗载体大肠杆菌基因突变体菌株细菌荧光质粒白色念珠菌载体体外转录载体谷氨酸棒杆菌载体酿酒酵母基因突变体菌株线虫载体斑马鱼载体 Zebra fish 果蝇，昆虫载体Drosophila 鱼类细胞载体 fish cell 分支杆菌载体克雷伯菌枯草芽孢杆菌基因缺失突变株
工程菌菌株
质粒菌株资料

产品编号	产品名称
	敲除基因，减少枯草芽孢杆菌的细胞自溶以提高重组蛋白的的产量

产品介绍

研究人员以前期构建的可以表达角蛋白酶的工程菌株Bacillus subtilis WB600-ker为出发菌株，在不同的发酵阶段，使用qRT-PCR技术对营养生长期作用的肽聚糖水解酶基因lytC、lytD、lytE、lytF、lytG、lytH、cwlC、cwlS及其相关转录调节因子sigD；原噬菌体相关肽聚糖水解酶基因xlyA、xpf、cwlA、pcfA；以及自食相关基因skfA、spbC的转录水平进行监测。结果显示，在发酵中后期这些基因的表达都存在不同程度上调，这与枯草芽孢杆菌细胞自溶表型一致。其中，基因lytC、cwlC、sigD、xpf、pcfA、skfA、spbC上调幅度较为显著，因此认为这是导致枯草芽孢杆菌细胞自溶的关键基因。研究人员以这7个基因作为敲除靶点，共构建127株自溶基因缺失菌株。其中xpf、lytC、pcfA和cwlC的多缺陷菌株B. subtilis BS∆XLPC-ker的生物量较出发菌株提高了57%。接着，通过细胞染色、绿色荧光蛋白成像和细胞外核酸泄漏实验证实了这一结果。最终在5 L发酵罐中表达测试目标角蛋白酶的活力是对照的1.46倍。另外，在B. subtilis BS∆XLPC中也分别将纳豆激酶和枯草蛋白酶E的活性提高1.50倍和1.43倍，进一步证实了策略的普适性。